细胞支原体去除 上海世途科生物科技供应

支原体污染和黑胶虫污染是两种不同类型的细胞培养污染，它们具有各自的特点和区别： 支原体污染：在相差显微镜下，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。 黑胶虫污染：在高倍镜下，被黑胶虫污染的细胞膜会变得模糊不清，边界不清晰，有粗糙感。
污染的影响： 支原体污染：可能导致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落，影响细胞的DNA、RNA及蛋白表达。 黑胶虫污染：与细胞竞争性生长，开始时对细胞没有什么影响，但当数量多时，细胞生长会受到影响直至死亡。
污染的来源： 支原体污染：可能来源于工作环境的污染、操作者本身、培养基的污染、交叉污染、实验器材带来的污染以及用来制备细胞的原始组织或部位的污染。 黑胶虫污染：可能来源于细胞本身的污染或从动物取材时的污染，也可能通过培养箱空气进行污染。 支原体检测的应用场景？细胞支原体去除

支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养，这取决于多种因素，包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法： 1. 直接丢弃：对于非重要的细胞，如果培养中的细胞、WCB的细胞等，可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。 2. 使用支原体清除剂：支原体清除剂处理细胞，作用浓度为25μg/ml，两周可以清*支原体。 3. 使用支原体清*培养基：每2~3天更换一次新鲜培养液，并用无菌的PBS洗涤细胞，处理15天后进行支原体检测，以确定支原体是否被完全去除。 4. 支原体去除试剂：这是一种混合制剂，可以通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果，且对细胞无伤害 细胞支原体去除巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒到底哪个比较好呢？

对于同一个样品，如果一步法恒温试剂盒检测结果为阳性，而PCR检测为阴性，可能的原因包括： 1. 检测的支原体种类不同：一步法恒温试剂盒可能检测的支原体种类更多，例如可以涵盖27种支原体，而PCR检测可能只针对常见的12种支原体进行检测。因此，如果样品中污染的支原体种类不在PCR检测的范围内，就可能出现一步法检测为阳性而PCR检测为阴性的情况。 2. 灵敏度的差异：PCR方法的灵敏度可能高于一步法恒温检测法。PCR可以检测到低至单个拷贝的支原体，而一步法恒温检测可能需要更高的支原体拷贝数，例如10^3^个拷贝。如果样品中支原体的数量低于一步法检测的灵敏度阈值，PCR检测可能无法检测到，导致阴性结果。 3. 样品中可能含有抑制PCR反应的物质：如果样品中存在PCR反应的抑制物，可能会影响PCR的扩增效率，导致即使存在支原体，PCR检测也可能呈现阴性结果。 4. 试剂盒的特异性和交叉反应：一步法恒温试剂盒可能具有更高的特异性，减少了与其他微生物的交叉反应，从而在PCR检测为阴性时仍能准确检测到支原体的存在。

一步法快速支原体检测的原理主要基于等温扩增技术，这是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。以下是具体的步骤和原理：
1. 等温扩增技术：一步法快速支原体检测试剂盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，环介导等温扩增）技术或类似的等温扩增技术。这些技术允许在恒定温度下进行DNA的快速扩增，通常在60-65°C之间。 2. 特异性引物：该方法使用设计好的特异性引物，这些引物靶向支原体DNA的保守区域。引物的设计确保了扩增过程的特异性，从而减少非目标序列的扩增。 3. 快速扩增：在适宜的条件下，等温扩增技术可以在15至60分钟内实现高达10^9至10^10倍的核酸扩增，从而快速检测出支原体的存在。 4. 颜色变化指示：一步法试剂盒中通常包含有颜色指示剂，当支原体DNA被扩增时，反应液的颜色会发生变化，从而可以通过肉眼直接观察到检测结果。例如，从蓝紫色变为天蓝色，表示样本中存在支原体。 5. 操作简便：一步法支原体检测不需要复杂的设备，通常只需要水浴锅或PCR仪即可完成操作，使得检测过程更加简便快捷。 支原体检测假阳性的原因？

支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响： 01/ 争夺营养：支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖  02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平  03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态  04/ 损害膜和细胞器  05/ 导致突变和染色体变化  06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失：支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失 07/ 实验结果的不可靠性  08/ 生物安全问题 支原体检测假阴性的原因？细胞支原体去除

细胞培养中支原体预防措施。细胞支原体去除

根据提供的信息，支原体去除试剂是一种混合制剂，通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果，同时对细胞无伤害。它被设计为对细胞毒性小，不影响后续的细胞实验，包括细胞活力检测和细胞转染等。这表明使用支原体去除试剂去除支原体后，理论上不应该对细胞的转染效率产生负面影响。 此外，支原体污染本身会对细胞的转染效率产生负面影响。研究表明，与未污染的细胞相比，支原体污染的细胞转染后具有较低的基因表达水平。因此，去除支原体后，可以预期细胞的转染效率会得到改善，因为移除了影响细胞正常功能的污染物。 细胞支原体去除