一步法快速支原体检测的原理主要基于等温扩增技术，这是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。以下是具体的步骤和原理：
1. 等温扩增技术：一步法快速支原体检测试剂盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，环介导等温扩增）技术或类似的等温扩增技术。这些技术允许在恒定温度下进行DNA的快速扩增，通常在60-65°C之间。
2. 特异性引物：该方法使用设计好的特异性引物，这些引物靶向支原体DNA的保守区域。引物的设计确保了扩增过程的特异性，从而减少非目标序列的扩增。
3. 快速扩增：在适宜的条件下，等温扩增技术可以在15至60分钟内实现高达10^9至10^10倍的核酸扩增，从而快速检测出支原体的存在。
4. 颜色变化指示：一步法试剂盒中通常包含有颜色指示剂，当支原体DNA被扩增时，反应液的颜色会发生变化，从而可以通过肉眼直接观察到检测结果。例如，从蓝紫色变为天蓝色，表示样本中存在支原体。
5. 操作简便：一步法支原体检测不需要复杂的设备，通常只需要水浴锅或PCR仪即可完成操作，使得检测过程更加简便快捷。
细胞培养过程中支原体污染怎么预防？南京细胞培养支原体检测服务
|
方法
|
灵敏度
|
优势
|
劣势
|
|
培养法
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 便宜
ü 金标准
|
ü 费劳力
ü 耗时长
ü 需要特定的培养基
ü 特定支原体种类需要特定的培养基
|
|
DNA染色
(DAPI or Hoescht)
|
☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 可能难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 可能假阳性可能性
|
|
间接染色
|
☆☆☆
|
ü 迅速
ü 便宜
ü 易检测
|
ü 费时
ü 需要细胞系指示
|
|
ELISA
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 客观，易判读结果
ü 可以鉴别支原体种属
|
ü 受抗体限制
ü 价格高
|
|
免疫染色
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 可检测支原体种属
ü 价格略高
|
ü 可检测的支原体种属有限
|
|
放射自显影
|
☆☆
|
ü 迅速
|
ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 费劳力
|
|
生物发光
|
☆☆
|
ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
|
ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
|
|
PCR
|
☆☆☆
|
ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特异性
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
|
|
Real-Time PCR
|
☆☆☆
|
ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特异性
ü 结果可靠
ü 高通量
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
|
|
LAMP
|
☆☆
|
ü 便捷
ü 无需DNA提取
ü *需10min左右的实验操作时间
ü 具有特异性
ü 高通量
|
ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
温州支原体去除试剂多少钱细胞培养中支原体污染对实验结果有什么影响？
|
需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类：
1. 生物医药企业：生产涉及细胞培养的生物制品的公司，包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司：进行细胞产品的研发和生产的企业，需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构：从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构，需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位：使用细胞技术进行的医院或诊所，需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库：保存和供应细胞株的细胞库，需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司：提供生物技术服务的公司，如细胞培养、基因编辑等，需要确保服务过程中细胞的质量。
支原体是一类细菌，由于缺乏细胞壁，具有灵活的膜结构。这使得支原体的形态多变，很难在高倍显微镜下识别。并且能够抵抗压力、温度、渗透压和脱水，对许多针对细胞壁合成的常见抗*素具有抗性。它们的体积非常小，直径通常在0.15~0.3μm，因此能够轻易地穿过过滤系统。支原体能在哺乳动物细胞培养中可以高浓度生长，而不引起明显的混浊或其他可见的污染迹象。
支原体通过特殊的前端细胞器与宿主细胞结合。支原体前端细胞器富含粘附素，可以附着在真核细胞上并穿透宿主细胞。支原体缺乏刚性细胞壁，可能有助于其与宿主细胞膜融合，并交换其膜和细胞质成分。支原体的对细胞的毒性包括支原体侵袭性、分泌的致病酶和一些膜成分等都能够有效地侵犯宿主。
支原体去除之后对细胞检测有无影响？
支原体去除试剂在清*支原体的过程中可能会对细胞的生长状态产生一定的影响。支原体去除试剂是一种非抗*素类试剂，它通过与支原体膜特异性结合，改变支原体膜的通透性，从而导致支原体破裂死亡。尽管该产品在作用期间可能会对细胞的活力和形态有一定的影响，但由于它不能穿过真核细胞的细胞膜，因此不会改变细胞的任何特性。支原体被清*后，细胞在后续的传代过程中能快速恢复其正常的生长和增殖状态，细胞后续的生长增殖几乎无影响。
此外，该产品不含抗*素，不会使支原体发生耐药反应，细胞毒性小。然而，需要注意的是，不同细胞对支原体去除试剂的耐受程度有所差异，可以根据实验结果适当调整细胞量和处理条件。在某些情况下，如果出现细胞变形、生长缓慢等现象，可以更换成标准培养液终止作用，或者调整去除试剂的使用浓度和作用时间。
支原体污染源和主要类型？温州支原体去除试剂多少钱
细胞培养为什么建议使用支原体检测？南京细胞培养支原体检测服务
LAMP法，即环介导等温扩增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原体检测中的应用具有以下特点和应用场景：
1. 日常监测：由于LAMP法的快速和简便性，它适用于生物实验室的日常监测，可以及时检测出支原体的存在，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 疾病诊断：LAMP法已被成功应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，并在2009年甲型H1N1流感事件中发挥了重要作用。
3. 临床应用：LAMP法在临床样本的检测中显示出了快速、高灵敏度和稳定性，可以用于检测实验室样本及临床样本中的支原体。
4. 多病原体检测：LAMP法可以同时检测多种病原体，包括肺炎支原体在内的多种下呼吸道感*的病原体，为临床诊疗提供询证依据。
5. 与其他技术结合：LAMP法可以与CRISPR-Cas12a等其他技术结合，建立新的检测方法，提高检测的效率和准确性。
南京细胞培养支原体检测服务
