2024-06-25 00:23:18
细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:
1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
细胞被支原体污染了会有什么影响?苏州支原体预防试剂多少钱
支原体预防的策略主要包括以下几个方面: 1. 控制污染源:通过定期检测和去除细胞培养中的支原体污染,确保细胞培养体系内无支原体存在,从而获得准确有效的实验数据。 2. 改善无菌操作技术:通过提高实验人员的操作技术和意识,避免在细胞培养过程中引入支原体污染。 3.使用无菌设备和耗材:使用无菌的细胞培养设备和耗材,如无菌培养基、血清等,减少支原体污染的风险。 4. 定期消毒和清洁:对实验室环境进行定期的消毒和清洁,包括工作台、培养箱等,以减少支原体的潜在污染。 5. 使用预防性试剂:使用专门针对支原体的预防性试剂,如加入细胞培养基中的预防剂、超净台喷雾、水浴锅预防和细胞培养箱水盘预防等,以预防支原体污染。 细胞培养支原体去除现货支原体检测的样本用什么合适?
支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响: 01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖 02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态 04/ 损害膜和细胞器 05/ 导致突变和染色体变化 06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失 07/ 实验结果的不可靠性 08/ 生物安全问题
qPCR法,即定量聚合酶链式反应(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面:
1. 快速定性检测:qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。
2. 临床样本检测:qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体,具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 监管要求:基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发,其性能满足或超出监管要求,如10CFU/mL。
4. 药物质量控制:qPCR法提供早期检测支原体污染的方法,适用于药物质量控制,具有快速、高度特异性、灵敏性,并符合国际准则。
支原体检测方法qPCR法?
细胞培养中支原体难以彻底消灭的原因主要包括以下几点: 1. 无细胞壁结构:支原体是没有细胞壁的微生物,这使得许多作用于细胞壁的抗*素对支原体无效。 2. 微小体积:支原体体积小,能够穿过常规的除菌滤膜,例如0.20微米甚至0.10微米的滤膜。 3. 隐匿性:支原体污染初期很难被察觉,它们在普通光学显微镜下几乎不可见,因此细胞被支原体污染后,前期很难被发现。 4. 传播途径多样:支原体可以通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径迅速传播。 5. 污染源 :支原体污染源包括细胞间的交叉污染、操作人员的口腔、皮肤,以及细胞培养用的组分如血清、培养液等。 6. 环境因素:实验室环境、试验台、超净台、培养箱等可能被支原体污染,引起细胞的污染。 7. 抗*素耐药性:支原体可能对某些抗*素产生耐药性,使得治*效果变差。 8. 检测和清理方法的局限性:一些传统的支原体检测和清理方法可能不够灵敏或有效,导致难以彻底清理支原体 支原体预防的实验步骤?温州细胞支原体检测说明书
对于同一个样品,为什么PCR结果为阳性,而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性?苏州支原体预防试剂多少钱
巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒各有优缺点,具体哪个更好要根据实验需求和条件来决定。 1. 巢式PCR法通过两轮PCR扩增来提高检测的特异性和灵敏度。它的优点是: 2. 特异性强,可以减少假阳性结果。 3. 灵敏度高,可以检测到很低数量的支原体。 4. 通过设计多对引物,可以覆盖多种支原体种类。 不过巢式PCR法也存在一些缺点: 1. 操作复杂,需要两轮PCR反应。 2. 容易受到PCR抑制物的影响,产生假阴性结果。 3. 反应后需要开盖电泳检测,增加了污染的风险。 而一步法恒温支原体检测试剂盒采用等温扩增技术,具有以下优点: 1. 操作简便,只需一次反应即可完成检测。 2. 灵敏度和特异性也很高,可检出10个拷贝以上的支原体污染。 3. 反应后无需开盖,减少了污染的风险。 但一步法试剂盒的缺点是: 1. 灵敏度虽高,但可能略低于巢式PCR法。 2. 价格可能比巢式PCR试剂盒要高。 苏州支原体预防试剂多少钱