杭州Protein AG免疫沉淀磁珠的选择 上海世途科生物科技供应

Co-IP（免疫共沉淀）技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用，其实验设计如下： 1. 样品准备：Co-IP实验通常有两种，一种是内源性蛋白相互作用验证，一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达；非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。 2. 沉淀诱饵蛋白：利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体，抗体会与诱饵蛋白结合，利用磁铁将磁珠拉下，同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。 3. SDS-PAGE及WB检测：得到沉淀后，需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离，随后利用WB检测是否存在靶蛋白。 4. 实验对照设置：为了避免“假阳性”，需要设置正确的对照，包括阴性对照和阳性对照（Input组）。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白。 5. 结果真实性：确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。 免疫沉淀IP抗体的选择？杭州Protein AG免疫沉淀磁珠的选择

Co-IP的实验步骤： 1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。 2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。 3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。 4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。 5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。 6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。 温州Co IP免疫沉淀磁珠价格免疫沉淀技术Co-IP的实验方法。

真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。 它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。

“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的结合蛋白，进行小规模的蛋白质亲和纯化的实验。更确切地说，IP是采用固定在微珠支持物(一般是琼脂糖树脂)上的特定抗体，从复杂的混合物中，纯化单一抗原的实验。固定化蛋白质复合物的组装既可以分步进行，也可以一步完成。 常见的加样顺序：抗体和样本(如细胞裂解物)一起孵育，然后加入亲和微珠，用于捕获抗体-抗原复合物。也可以将抗体和微珠(通过抗体结合蛋白，如蛋白A、G或A/G等，直接或间接结合抗体)先进行孵育，然后再加入含有抗原的样本。当抗原、抗体和固相支持物产生结合以后，充分洗涤微珠，再采用适当的洗脱缓冲液从支持物上洗脱抗原。
免疫沉淀技术IP是什么？

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验设计通常包括以下几个关键步骤：
1. 目标蛋白质的选择： 2. 抗体的选择：选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质 3. 样本的准备：收集和准备细胞或组织样本。 4. 蛋白质的裂解和释放：选择合适的裂解条件，如pH值、离子强度、去污剂等。 5. 蛋白质浓度的测定：确定裂解液中蛋白质的浓度，以便于后续步骤的标准化。 6. 免疫沉淀的操作：将特异性抗体与裂解液混合，并在适宜的条件下孵育，以形成抗体-抗原复合物。 7. 非特异性结合的减少：通过预纯化步骤去除可能的非特异性结合蛋白。 8. 洗涤：多次洗涤以去除未结合的蛋白质和杂质。 9. 目标蛋白质的洗脱：使用适当的缓冲液洗脱抗体-抗原复合物。 10. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行进一步分析，如Western Blot. 11. 对照实验：设计适当的正对照和负对照，以评估实验的特异性和敏感性。 免疫沉淀IP技术选琼脂糖珠还是磁珠？北京Co IP免疫沉淀磁珠多少钱

免疫沉淀ChIP抗体的选择？杭州Protein AG免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验方法通常包括以下步骤： 1. 样本准备 2. 蛋白质浓度测定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。 3. 抗体预处理：如果使用预固定的抗体，需先将抗体固定在固相支持物上，如琼脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反应：将裂解液与特异性抗体（固定或未固定）混合，并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜，以允许抗体与目标蛋白质充分结合。 5. 固相支持物的回收：对于未固定的抗体，加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。 6. 洗涤：去除未结合的蛋白质和杂质，通常需要多次洗涤固相支持物。 7. 洗脱：使用适当的洗脱缓冲液（如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液）从固相支持物上洗脱免疫复合物。 8. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等，以进一步分析目标蛋白质。 杭州Protein AG免疫沉淀磁珠的选择

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