温州anti Flag免疫沉淀技术服务 上海世途科生物科技供应

免疫沉淀实验步骤： 1. 样品制备 a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。 b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。 4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱 免疫沉淀技术RIP的应用有哪些？温州anti Flag免疫沉淀技术服务

Co-IP（免疫共沉淀）技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用，其应用场景如下： 1. 蛋白质相互作用网络的鉴定：Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络，发现目标蛋白的结合伙伴。 2. 信号传导途径的研究：通过Co-IP技术，科学家们发现了许多关键的细胞信号通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。 3. 药物靶点筛选：利用Co-IP技术，研究人员可以筛选潜在的药物靶点。 疾病机制研究：通过分析疾病相关蛋白质的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。 4. 抗体药物开发：Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性，评估抗体药物的亲和力和特异性。 5. 转录因子研究：Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用，进而揭示基因调控网络。 深圳IP免疫沉淀磁珠现货免疫沉淀Co-IP技术选琼脂糖珠还是磁珠？

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验设计通常包括以下几个关键步骤：
1. 目标蛋白质的选择： 2. 抗体的选择：选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质 3. 样本的准备：收集和准备细胞或组织样本。 4. 蛋白质的裂解和释放：选择合适的裂解条件，如pH值、离子强度、去污剂等。 5. 蛋白质浓度的测定：确定裂解液中蛋白质的浓度，以便于后续步骤的标准化。 6. 免疫沉淀的操作：将特异性抗体与裂解液混合，并在适宜的条件下孵育，以形成抗体-抗原复合物。 7. 非特异性结合的减少：通过预纯化步骤去除可能的非特异性结合蛋白。 8. 洗涤：多次洗涤以去除未结合的蛋白质和杂质。 9. 目标蛋白质的洗脱：使用适当的缓冲液洗脱抗体-抗原复合物。 10. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行进一步分析，如Western Blot. 11. 对照实验：设计适当的正对照和负对照，以评估实验的特异性和敏感性。

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验设计需要考虑多个方面，以确保实验的准确性和可重复性。 1. 目标蛋白的选择：确定你想要研究的目标RNA结合蛋白（RBP）。 2. 阳性和阴性对照：设计实验时，需要包括阳性对照和阴性对照。 3. 细胞培养与裂解：选择合适的细胞类型进行培养。 4. 抗体孵育：将特异性抗体与细胞裂解液孵育，以形成抗体-蛋白质-RNA复合物。 5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子进行免疫沉淀，捕获抗体-蛋白质-RNA复合物。 6. 洗涤和分离：洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。从珠子上分离RNA，可能需要使用低pH缓冲液或蛋白酶K处理。 7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下来的RNA。 8. 数据分析：对实验结果进行定量分析，比较不同样品之间的RNA水平。

9. 实验重复：为了确保结果的可靠性，实验应该进行至少三次重复。 免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠？

10. 技术验证：使用其他技术（如RNA-pull down或FISH）验证RIP实验结果。

免疫共沉淀分析（Co-IP）与IP十分类似，基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体；但IP的目标是纯化单一抗原，而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。 在Co-IP实验中，已知抗原称为诱饵蛋白，与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等，蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。 基本的Co-IP实验方案与IP相同，实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是，还有许多其他因素需要考虑，例如，结合和洗涤条件的优化，优化时，需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。
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免疫沉淀的操作步骤？温州anti Flag免疫沉淀技术服务

免疫沉淀ChIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。 琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。 与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。 简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。 温州anti Flag免疫沉淀技术服务

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