2024-06-03 10:12:00
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。 基本原理 免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质(抗原)之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体,可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。 免疫沉淀技术有多种类型,包括: 1. 个别免疫沉淀法(Individual IP) 2. 免疫共沉淀法(Co-IP) 3. 染色质免疫沉淀法(ChIP) 4. RNA免疫沉淀法(RIP) 近年来,免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。 免疫沉淀技术IP的实验方法。免疫沉淀技术服务
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物化学方法,它利用特异性抗体对抗原进行亲和纯化。在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A/G-Beads(预先将Protein A/G固定结合在磁珠上),根据抗原与抗体、Protein A/G与抗体的Fc的特异性,形成“抗原-抗体-Protein A/G-Beads”复合物,清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白,检测是否存在目的蛋白。 免疫沉淀技术常用于从细胞或组织裂解物中分离用于免疫印迹检测或其他检测技术的蛋白和其他生物分子。它的目标是分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测的蛋白质。 温州Co IP免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠免疫沉淀ChIP抗体的选择?
Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其实验设计如下: 1. 样品准备:Co-IP实验通常有两种,一种是内源性蛋白相互作用验证,一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达;非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。 2. 沉淀诱饵蛋白:利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体,抗体会与诱饵蛋白结合,利用磁铁将磁珠拉下,同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。 3. SDS-PAGE及WB检测:得到沉淀后,需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离,随后利用WB检测是否存在靶蛋白。 4. 实验对照设置:为了避免“假阳性”,需要设置正确的对照,包括阴性对照和阳性对照(Input组)。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测,验证细胞裂解液中存在蛋白。 5. 结果真实性:确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。
Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其应用场景如下: 1. 蛋白质相互作用网络的鉴定:Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络,发现目标蛋白的结合伙伴。 2. 信号传导途径的研究:通过Co-IP技术,科学家们发现了许多关键的细胞信号通路,如MAPK和PI3K/Akt通路等,为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。 3. 药物靶点筛选:利用Co-IP技术,研究人员可以筛选潜在的药物靶点。 疾病机制研究:通过分析疾病相关蛋白质的相互作用,Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。 4. 抗体药物开发:Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性,评估抗体药物的亲和力和特异性。 5. 转录因子研究:Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用,进而揭示基因调控网络。 免疫沉淀纯化所得抗原量低是什么原因?
Co-IP的优势: 1. 生理相关性:Co-IP可以在接近生理条件的条件下捕获蛋白质相互作用。 2. 特异性:使用特异性抗体可以提高实验的特异性。 3. 广泛应用:Co-IP技术适用于多种样本类型,包括细胞培养、组织样本等。 Co-IP的局限性: 1. 抗体依赖性:需要高质量的特异性抗体,否则可能得到假阳性或假阴性结果。 2. 非特异性结合:可能存在非特异性结合问题,需要仔细的实验设计和对照来控制。 3. 技术挑战:对于低丰度或弱相互作用的蛋白质,Co-IP可能面临技术挑战。 免疫沉淀RIP技术选琼脂糖珠还是磁珠?温州Co IP免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠
免疫沉淀技术是什么?免疫沉淀技术服务
RNA免疫沉淀技术(RIP)是一种研究RNA与蛋白质相互作用的重要方法,其应用领域主要包括: 1. 转录后调控研究:RIP技术可以帮助研究者了解RNA在转录后水平如何被调控。 2. 表观遗传调控:RIP技术用于研究RNA结合蛋白(RBPs)在表观遗传调控中的作用。 3. 非编码RNA功能研究:RIP技术可以用来研究长非编码RNA(lncRNA)、miRNA和其他小RNA的种类,以及它们如何与蛋白质相互作用来调控基因表达。 4. RNA病毒研究:RIP技术也可用于研究RNA病毒与其宿主细胞内蛋白质的相互作用,进而了解病毒复制和致病机制。 5. RNA修饰和甲基化研究:RIP技术结合其他技术如m5C-RIP-seq,可用于研究RNA甲基化修饰及其在病理过程中的作用。 6. RNA定位和稳定性:通过RIP技术,研究者可以探索特定RNA在细胞内的定位以及它们如何被稳定或降解。 7. RNA-蛋白质复合物的鉴定:RIP技术可以用来鉴定与特定RNA结合的蛋白质,从而揭示RNA-蛋白质复合物的组成。 8. 疾病相关RNA研究:RIP技术在疾病相关RNA的研究中也有应用。 免疫沉淀技术服务
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